PCR實驗室設計要求(上)

 

        1.PCR實驗室平面布局。

        PCR擴增試驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區：試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增反應混合物制備和擴增區、擴增產品分析區。為避免交叉污染，進入各工作區畢須嚴格遵循單一方向，即只能從試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增反應混合物制備和擴增區→擴增產品分析區。各試驗區之間的試劑和樣品傳輸應通過傳輸窗口進行。

        2.實驗室空調通風系統設計及壓力控制。

        PCR實驗室沒有嚴格的凈化要求，但為了避免各實驗區之間交叉污染的可能性，應采用全排氣的氣流組織形式。同時，嚴格控制送排氣比例，確保各實驗區的壓力要求。

        2.1.試劑儲存和準備區。

        試驗區的主要操作是儲存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合物的制備。樣品生產中使用的試劑和材料應直接運輸到該區域，不得通過其他區域。試劑原料畢須儲存在該區域，并在該區域制備所需的儲存試劑。對氣流壓力的控制沒有嚴格的要求。

        2.2.標本制備區。

        該區域的主要操作是樣品的保存、核酸（RNA.DNA）的提取、儲存和添加到擴增反應管和DNA測量的合成中。該區域的壓力梯度要求為：相對于相鄰區域為正壓，以避免從相鄰區域進入該區域的氣溶膠污染。此外，由于加樣操作中氣溶膠可能造成的污染，應避免不必要的行走。

        2.3.擴增反應混合物配制和擴增區。

        該區域的主要操作是DNA擴展。此外，DNA模板（樣品制備區）的添加和主反應混合物（試劑儲存和制備區）也可以在該區域進行。該區域的壓力梯度要求為：相對于相鄰區域的負壓，以避免氣溶膠從該區域泄漏。為了避免氣溶膠造成的污染，應盡量減少該區域不必要的行走。超凈臺應進行個別操作，如加樣。

        2.4.擴大產品分析區。

        該區域的主要操作是測量擴增片段。該區域是擴增產品污染的主要來源，因此該區域的壓力梯度要求為負壓，以避免擴增產品從該區域擴散到其他區域。

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